Introduzione. L’ED induce uno stato di infiammazione cronica ed un aumento dello stress ossidativo (SO), fattori di rischio per patologia cardiovascolare. La PTX3 è prodotta dall’endotelio e dalle cellule mononucleate in corso di infiammazione. L’aumento dei livelli plasmatici della PTX3 si associa a un’aumentata mortalità cardiovascolare nei pazienti (pz) con malattia renale cronica.

Scopi. Valutare la produzione NADPH-dipendente di ROS da parte dei neutrofili circolanti in ED ed il loro ruolo nella produzione di PTX3.

Pazienti e metodi. Sono stati arruolati 60 pz in ED trisettimanale trattati con membrane sintetiche (età media 62,5 aa; età dialitica media 44,3 mesi) e 10 soggetti sani (C). L’attivazione dei neutrofili, l’espressione genica e proteica di PTX3 sono stati analizzati con citofluorimetria, Real Time-PCR e microscopia confocale. La produzione intracellulare di ROS è stata valutata mediante fluorescenza con la 2',7'-Diclorodiidrofluoresceina. L’attività della NADPH ossidasi à stata determinata mediante chemiluminescenza. I livelli plasmatici di PTX3 sono stati misurati mediante ELISA.

Risultati. L’analisi citofluorimetrica dei neutrofili (CD16b+, CD18+) mostrava un incremento dell’espressione della L-selectina (CD62L) dopo 30’ (T30) e 240’ (T240) di ED, rispetto all’inizio della seduta (T0) (p=0,01), a conferma della loro attivazione. L’attivazione dei neutrofili si associava ad un aumento dell’espressione genica e proteica della PTX3 (T30 vs T0, p=0,0003; T240 vs T0, p<0,0001). La PTX3 colocalizzava con la Collagenasi IV all’interno dei granuli citoplasmatici ed il suo rilascio da parte dei neutrofili si associava ad un aumento dei suoi livelli plasmatici, più evidente al T240 (p=0,005 vs T0).

I livelli di ROS intracellulari erano aumentati dopo T240 di ED (74,1±14,0 % cellule positive) rispetto al T0 (29,6±15,5 % cellule positive; p=0.009), indicando un aumento dello SO. Inoltre, la produzione di superossido NADPH-dipendente era aumentata a T240 (553,2±83,3 RLU/min*0,015mg) rispetto al T0 (245,0±54,1 RLU/min*0,015mg; p=0,01).

Conclusioni. I nostri risultati dimostrano che in ED è presente uno stato di attivazione dei neutrofili caratterizzato da un aumento dell’espressione di PTX3 e della produzione NADPH-dipendente di ROS.