Tra i diversi polimorfismi associati al fenotipo ipertensivo, il polimorfismo dell’alfa adducina (Add.), G460W, si associa a pazienti affetti da ipertensione sodio resistente. I ratti MHS (Milan Hypertensive Strain) esprimono una mutazione nell’alfa adducina, F316Y, associata ad ipertensione sodio-dipendente, pertanto, rappresentano un modello sperimentale per lo studio del ruolo dell’alfa adducina nell’ipertensione. I ratti MHS presentano un'aumentata attività della pompa Na+/K+-ATPasi, (Torielli et al., 2008 [1] (full text)) e un incremento dell’espressione del cotrasportatore Na+-Cl- (NCC) nel tubulo contorto distale (Capasso et al., 2008 [2] (full text)). Dimke et al., 2011 [3] (full text) hanno dimostrato che la subunità gamma adducina interagisce direttamente con NCC stimolandone l’attività. Lo scopo di questo studio è quello di evidenziare se c’è interazione dell’alfa adducina wild type e/o mutata con la NCC e se questa interazione può indurre cambiamenti post-traduzionali (come la fosforilazione) tali da favorire il fenotipo ipertensivo.
Per gli studi di interazione in vitro, le forme di alfa adducina mutata e wild type sono state trasfettate in cellule renali MDCK (Madin-Darby Canine Kidney) contenenti un sistema di espressione inducibile di NCC con la tetraciclina. Le proteine cellulari sono state immunoprecipitate con due diversi anticorpi (Flag Tag–NCC, Ha Tag-Adducina) legati alla proteina- A-agarosio. Il risultato è stato visto mediante western blotting.
L’alfa adducina, mutata e wild type, interagisce sia con la forma totale che con la forma fosforilata di NCC. Gli immunoprecipitati legati alla NCC si associano all’alfa adducina e la medesima interazione emerge immunoprecipitando per l’alfa adducina.
Questi risultati preliminari suggeriscono che l’alfa adducina interagisce con la NCC. Esperimenti relativi allo studio del trafficking di NCC, in vitro, e alla caratterizzazione del fenotipo ipertensivo, in vivo, sono in corso per confermare questa ipotesi.
[1] Torielli L, Tivodar S, Montella RC et al. alpha-Adducin mutations increase Na/K pump activity in renal cells by affecting constitutive endocytosis: implications for tubular Na reabsorption. American journal of physiology. Renal physiology 2008 Aug;295(2):F478-87 (full text)
[2] Capasso G, Rizzo M, Garavaglia ML et al. Upregulation of apical sodium-chloride cotransporter and basolateral chloride channels is responsible for the maintenance of salt-sensitive hypertension. American journal of physiology. Renal physiology 2008 Aug;295(2):F556-67 (full text)
[3] Dimke H, San-Cristobal P, de Graaf M et al. γ-Adducin stimulates the thiazide-sensitive NaCl cotransporter. Journal of the American Society of Nephrology : JASN 2011 Mar;22(3):508-17 (full text)
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