La lettura delle biopsie renali in pazienti con IgAN può essere effettuata seguendo due tipi di classificazione. La prima “lumped system” (Schena FP e Coppo R, 2004) si basa su 3 gradi (G) di gravità: lieve (G1), moderato (G2), severo (G3). La seconda “split system”, conosciuta come classificazione di Oxford o MEST, (Cattran D et al, 2009) valuta 4 lesioni: ipercellularità Mesangiale (M0-1), ipercellularità Endocapillare (E0-1), glomerulosclerosi Segmentale (S0-1), fibrosi interstiziale/atrofia Tubulare (T0-1).
Scopo del nostro lavoro è stato studiare i profili genici dei diversi gradi istologici di malattia e di identificare i geni candidati che possono essere coinvolti nello sviluppo delle 4 lesioni indicate nella classificazione MEST.
Lo studio è stato eseguito su biopsie renali incluse in paraffina (FFPE) di 34 IgAN, 12 glomerulonefriti a lesioni minimi, 12 glomerulonefriti membranose e 6 donatori viventi (KLD), Un ulteriore gruppo di 15 biopsie di IgAN sarà utilizzato per studi di validazione indipendente. Figura 1.
Un numero minimo di 8 glomeruli per biopsia è stato ritenuto sufficiente per la diagnosi di IgAN, la valutazione e la classificazione delle lesioni istologiche sono state eseguite in cieco e in maniera indipendente da tre patologi (RM, LG, GC) nei tre centri di arruolamento.
I profili di espressione genica completi sono stati ottenuti attraverso microarray Illumina HumanHT-12. L'analisi delle pathway maggiormente rappresentate è stata eseguita tramite il software Ingenuity Pathway Analysis (Qiagen), mentre i trascritti di maggiore interesse sono stati validati mediante Real Time PCR.
La “principal component analysis” ha mostrato 107 trascritti che distinguevano la IgAN dai KLD mentre 152 trascritti distinguevano la IgAN dalla non-IgAN, Figura 2. Abbiamo inoltre identificato 28 geni modulati esclusivamente nel tessuto renale dei pazienti IgAN.
L’analisi trascrittomica delle biopsie IgAN secondo la classificazione “lumped” ha evidenziato una netta differenza nell’espressione genica dei tre gradi di severità, portando all’identificazione di 909 geni specifici della classe G1 rispetto alla G2 e G3, 78 geni specifici per G2 e 184 geni specifici per G3 Figura 3. I geni di maggiore interesse per ognuna delle 3 classi sono in fase di validazione mediante Real Time PCR.
Abbiamo, infine, confrontato il profilo di espressione genica delle 4 lesioni della classificazione MEST identificando pathways e cluster di geni che distinguono in modo specifico ogni lesione istologica Figura 4, Figura 5. La gran parte di questi geni fa parte di processi apoptotici, danno cellulare renale e processi di regolazione del sistema immunitario.
L’applicazione delle tecniche di trascrittomica su sezioni di tessuto renale FFPE ha permesso di evidenziare il coinvolgimento di specifiche pathways che potrebbero essere responsabili dello sviluppo delle lesioni istologiche che concorrono alla patologia renale. I classificatori molecolari identificati potranno essere target specifici per la scelta dei farmaci utili alla cura della IgAN.
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