L’infiammazione cronica e la de-regolazione della risposta immunitaria sono caratteristiche tipiche della malattia renale cronica terminale (CKD) con aumentata incidenza di sepsi e tumori. Diverse tossine uremiche (UT) sono coinvolte nella disfunzione immunologica. Le microvescicole (MV) sono microparticelle implicate nel cross-talk intercellulare mediando trasferimento di RNA a cellule target. La nostra ipotesi è che MV circolanti nel plasma possano agire in sinergia con UT nell’inibire la risposta immunitaria.
Scopo del lavoro: isolare e caratterizzare MV plasmatiche di pazienti con CKD e studiare il loro effetto biologico in differenti cellule del sistema immunitario.
Isolamento mediante ultracentrifugazione di MV da plasma di 50 pazienti con CKD stadio IV/V. Analisi della morfologia e concentrazione (Nanosight) e caratterizzazione proteica (FACS). In vitro, abbiamo studiato gli effetti delle MV su cellule del sistema immunitario (monociti, neutrofili, linfociti, cellule NK) mediante saggi di biologia cellulare e molecolare.
Rispetto ai sani, i livelli plasmatici di MV sono aumentati in pazienti CKD stadio IV/V. Le MV esprimono molecole pro-infiammatorie e pro-apoptotiche (Tissue Factor, C5b-9, CD40-Ligand, Fas-Ligand) e markers di leucociti/piastrine. In vitro, MV da plasma di pazienti CKD sono internalizzate in: 1) monociti, diminuendo espressione molecole co-stimolatorie (CD40, CD80, CD86) e presentazione antigenica; 2) neutrofili, stimolando apoptosi mediata da ROS; 3) linfociti, inducendo apoptosi nelle cellule B e T e una polarizzazione verso fenotipo T helper1; 4) cellule NK, diminuendo espressione di NKG2D e la capacità di inibizione della proliferazione di linee cellulari di tumore polmonare, renale e di mammella. Gli effetti delle MV CKD sulle differenti cellule immunitarie sono inibiti da trattamento con RNase, l’enzima che degrada RNA nelle MV stesse.
Le MV nel plasma di pazienti CKD stadio IV/V sono significativamente aumentate rispetto a controlli sani. MV CKD attivano l'infiammazione e inibiscono la risposta immunitaria attraverso il trasferimento di specifici mRNA e microRNA alle cellule target
