In corso di AKI indotto da sepsi, l’aumento sierico del LBP determina un'eccessiva attivazione del TLR-4 a livello delle cellule renali residenti. I PC contribuiscono alla progressione della malattia renale cronica differenziandosi in miofibroblasti. Tuttavia, il loro ruolo nell’AKI secondaria a sepsi è ancora sconosciuto.
L’AKI secondaria a sepsi è stata indotta in 8 maiali con infusione di LPS (300μg/Kg). Accanto ai maiali controllo (n=8), 8 maiali sono stati trattati con Coupled Plasma Filtration Adsorption (CPFA, Bellco) per 6h. Biopsie renali sono state effettuate prima (T0) e dopo 9h (T9) dalla somministrazione di LPS. Colture di PC (PDGFRβ+) sono state stimolate con LPS e co-incubate con i diversi sieri dei maiali settici, ed analizzate mediante FACS, WB e IF.
L’analisi delle biopsie renali dei maiali settici dimostrava una significativa attivazione dei PC, che presentavano una ridotta espressione del PDGFRβ, acquisendo un fenotipo miofibroblastico (αSMApos). Il trattamento con CPFA preservava il fenotipo dei PC (IHC PDGFRβ+,74.7±3.56 vs settico:35.5±7.42,p=0.03) con rarissime cellule αSMApos (2.05±0.19 vs settico:13.5±3.53, p=0.001)[FIG1A]. In vitro, i PC in presenza dei sieri settici o di LPS incrementavano l'espressione del Collagene I e di αSMA (p<0.05), con riorganizzazione in miofibrille [FIG1B-C]. I sieri degli animali trattati con CPFA preservavano il fenotipo dei PC e l’aggiunta di LBP esogeno comportava l'induzione di PMT [FIG1D]. Analizzando la via di trasduzione del segnale della PMT, si osservava un'aumentata fosforilazione di Smad2/3 ed ERK-1 (p<0.05). Inoltre, l'incremento sierico del TGF-β osservato nei maiali settici risultava drasticamente ridotto nei trattati.
I nostri dati dimostrano che il trattamento con CPFA, attraverso la rimozione di LBP , riduce significativamente la PMT e previene lo sviluppo della fibrosi tubulo-interstiziale.
PMT in vivo e in in vitro. A. Immunoistochimica (PDGFRβ) e Immunofluorescenza su tessuto renale (PDGFRβ -verde/αSMA-rosso). Dopo 9h dall'infusione di LPS (LPS T9) i PC downregolano il PDGFRβ (IHC) e acquisiscono un fenotipo miofibroblastico con aumento di αSMA rispetto al controllo (CTR T9). La CPFA (LPS/CPFA T9) riporta il fenotipo dei PC alla condizione basale (CTR T9).B. Immunofluorescenza su PC stimolati con LPS per 24h; LPS induce un’intensa riorganizzazione delle stress fibers di αSMA, indice di aumentata contrattilità. C. Analisi FACS dei PC stimolati con LPS per 24h; LPS aumenta l'espressione del Collagen I. D. Analisi FACS dei PC incubati con i diversi sieri dei maiali e in presenza di LBP per 24h. Il siero settico incrementa l'espressione del Collagen I (LPS), rispetto al CTR. Il siero dei maiali trattati (LPS/CPFA) riporta l'espressione del Collagene I ai livelli basali e l'aggiunta di LBP reverte gli effetti del trattamento inducendo PMT (LPS/CPFA+LBP).
