RAZIONALE

Lo scambiatore Cl^-/H⁺ (ClC-5), codificato dal gene ClCN5, è una proteina di 764 aa che appartiene alla famiglia altamente conservata dei Canali del Cl e degli scambiatori Cl^-/protoni. ClC-5 è espresso nel rene a livello del tratto S3 del tubulo prossimale, nel tratto ascendente dell'ansa di Henle e nelle cellule intercalate del dotto collettore. ClC-5 è parte del complesso macromolecolare coinvolto nell’ endocitosi dell’albumina (Hryciw DH, 2006) [1]. Recentemente il nostro gruppo ha dimostrato la sua presenza anche a livello del compartimento glomerulare in particolare nella glomerulonefrite membranosa dove è risultato up-regolato rispetto a glomeruli di controllo (Ceol M 2012 [2] (full text)).

Scopo del nostro lavoro è stato quello di valutare l’espressione del ClC5 in biopsie renali di pazienti con nefropatia lupica per: 1) verificare la presenza di questa molecola nei due compartimenti (glomerulare e tubulare); 2) valutare le possibili relazioni con i dati clinici e di laboratorio al momento della biopsia; 3) determinare l'influenza di farmaci antiipertensivi ed immunosoppressori sull'espressione di ClC-5.

CASISTICA E METODI

Sono state raccolte 24 biopsie renali di pazienti con nefrite lupica. L'analisi  immunoistochimica è stata condotta utilizzando una metodica di immunoperossidasi indiretta con anticorpo primario anti ClC-5 (Sigma Aldrich) su sezioni fissate e paraffinate (Figura 1). L'immunodeposizione di ClC-5 è stata quantificata nei due compartimenti renali mediante analisi morfometrica con software Image ProPlus (Media Cybernetics) (Figura 2A). Per ciascuna biopsia sono stati selezionati tutti i glomeruli ed il corrispondente compartimento tubulare ad un ingrandimento 200X. La quantificazione è stata espressa come percentuale della media dell'area coperta dal segnale (pixels).

RISULTATI

La quantificazione di ClC5 è risultata maggiore nel compartimento tubulare (m 0,039 + 0,030) rispetto al glomerulare (m 0,0014 + 0,0019) (p=0,000) (Figura 2B); l’espressione di ClC5 è risultata direttamente correlata tra i due compartimenti sia considerando i pazienti nel loro insieme (r=0,64 p=0,000) (Figura 3 A) che suddivisi in base ai valori di pressione arteriosa (normotesi r=0,66 p=0.009 ed ipertesi r=0,65 p=0,004), alla terapia con ACEi o ARBs r=0,75 p=0,004, o alla   presenza di sindrome nefrosica r=0,72 p=0,004, tale relazione viene mantenuta solo nei pazienti senza terapia immunosoppressiva (Figura 3 E).

È emersa una debole correlazione diretta tra proteinuria 24h e ClC5 glomerulare nei pazienti senza terapia immunosoppressiva (Figura 3 D) che si rafforza considerando tutti i pazienti con sindrome nefrosica (r=0,68 p=0,009) (Figura 3 B). Abbiamo inoltre notato una riduzione dell’espressione di ClC5 in entrambi i compartimenti nei pazienti che assumevano terapia immunosoppressiva rispetto ai non trattati (Figura 3 C), a supporto della relazione tra proteinuria e ClC5 glomerulare.

CONCLUSIONI

La quantificazione di ClC5 nei due compartimenti renali di pazienti con nefropatia lupica ci ha permesso di dimostrare una relazione diretta tra l’espressione di ClC5 glomerulare e quella tubulare, tale relazione rimane indipendentemente dal livello di proteinuria, dalla presenza di ipertensione o dal trattamento con ACE-i o ARBs. Interessante è l’influenza dei farmaci immunosoppressori in termini di relazioni fisiopatologiche. Il nostro studio supporta l’ipotesi che il compartimento glomerulare reagisca allo stimolo della proteinuria anche attraverso il coinvolgimento di ClC5 nel tentativo di controbilanciare la perdita proteica.